2017年高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和分离

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血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质(缩写为Hb或HGB)。是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。氧气结合在铁原子上，被血液运输。血红蛋白的特性是：在氧含量高的地方，容易与氧结合;在氧含量低的地方，又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。

一、蛋白质的提取和分离一般分为四步：

1、样品处理：包括洗涤红细胞;血红蛋白稀释;离心等操作收集到的血红蛋白溶液。

2、粗分离：透析除去分子较小的杂质。

3、纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。

4、纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。

二、样品处理

1、红细胞的洗涤：

目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固;离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆;用生理盐水洗涤。

2、血红蛋白的释放：

在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放

3、分离血红蛋白溶液：

离心分层;滤纸过滤去除脂溶性沉淀层;分液漏斗分出红色透明液体。

4、透析：

装入透析袋并置于磷酸缓冲液中(PH为7.0)透析。

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