每个人都曾试图在平淡的学习、工作和生活中写一篇文章。写作是培养人的观察、联想、想象、思维和记忆的重要手段。大家想知道怎么样才能写一篇比较优质的范文吗？接下来小编就给大家介绍一下优秀的范文该怎么写，我们一起来看一看吧。
蛋白表达方式篇一
一、胶原蛋白基础知识
1、什么是胶原蛋白？
蛋白质是以氨基酸为基本单位构成的生物大分子，是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命，机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。而胶原蛋白是人体内最多的一种蛋白质，占了人体蛋白质总和的30—40%。
2、什么是胶原蛋白多肽？
胶原蛋白是大分子蛋白质，其分子量在30万以上，人体很难消化吸收。胶原蛋白多肽是分子量3000—20000左右的小分子蛋白，具有很好的生物功能性和较高的消化吸收性，吸收率可达95—100%，现在食品界所说的胶原蛋白其实都是指胶原蛋白多肽。
3、胶原蛋白对人体各部位的作用
皮肤——皮肤可分表皮、真皮及皮下组织三层，最外表为表皮，可防止外界异物入侵。由表皮外侧往内，依次是角质层、透明层、颗粒层、有棘细胞层及基底细胞层等五层细部结构，由于基底细胞层会有老旧细胞向上层顶升，大约两个星期左右到达最外层，所以角质层最后会成为污垢而剥落。皮下真皮组织的70％是胶原蛋白，皮肤有如一个大套子紧紧包住身体各处，表面积相当大，人体四肢活动时，皮肤中胶原蛋白发挥功能，使皮肤具有保护功能，又有适当弹性及坚硬度，所以胶原蛋白能够保持皮肤象20岁时的紧致、柔嫩感。表皮的基底膜与真皮中的胶原蛋白紧密结合，真皮呈现波浪状也使得表皮随之起伏。手脚能自由弯曲，跳高时具有弹性，主要归功于胶原蛋白。胶原蛋白在皮肤结构中是紧紧包住真皮层中的毛根皮脂腺以及细胞。皮肤老化后会失去弹性，主要也与胶原蛋白有关。
眼睛——角膜和结膜组织的主要成分是胶原蛋白，补充胶原蛋白能够有效预防眼部疾病。头发——头发的健康关键在于头发的基础头皮皮下组织的营养，位于真皮层胶原蛋白是表层及表皮附属物的营养供应站，表皮附属物主要是毛发与指甲，皮肤缺乏胶原蛋白，头发就会干燥分叉。另外构成头发的角蛋白与胶原蛋白结构极为相似，补充胶原蛋白能够增强发质润泽。
牙齿——牙齿主要成分之一的象牙质的18％和组成牙龈和牙根的组织成分大部分为胶原蛋白，平时口服补充胶原蛋白就能够有效预防牙龈炎等牙齿、口腔疾病。
指甲——前面已经提到位于真皮层胶原蛋白是表皮层及表皮附属物的营养供应站，指甲是表皮附属物，人体胶原蛋白流失，指甲容易断裂、晦暗无光泽。
胸部——乳房主要由结缔组织和脂肪组织构成，而挺拔丰满的乳房很大程度上依靠结缔组织的承托，胶原蛋白是结缔组织的主要成分，在结缔组织中胶原蛋白常与多糖蛋白相互交织成网状结构，产生一定的机械强度，是承托人体曲线，体现挺拔体态的物质基础。补充胶原蛋白，可以起到自然丰胸效果。
内脏器官——机体五脏六腑没有不受胶原蛋白影响的，缺乏胶原蛋白会严重影响脏器健康甚至引发各种疾病，充分补充胶原蛋白可以协助内脏器官营养补充和运动，有效预防疾病。骨骼——骨骼中有机物的70%～80%是胶原蛋白，骨骼生成时，首先必须合成充足的胶原蛋白纤维来组成骨骼的框架。因此，有人称胶原蛋白为骨骼中的骨骼。胶原蛋白的流失或缺乏会引起骨质疏松等疾病。筋腱——构成骨骼与肌肉相联的筋腱的成分80％是胶原蛋白。缺乏胶原蛋白会因起筋腱与肌肉的衰弱。因此，补钙应先补充胶原蛋白
关节——关节是骨与骨间的软骨，软骨的50％构成物质是胶原蛋白，人体由于胶原蛋白流失与缺乏而导致的关节病症情况较多。
4、胶原蛋白适用人群 ※健康人群
※亚健康人群，如易疲劳，睡眠不好，记忆力减退，未老先衰的人群
※皮肤粗糙、多斑、起皱，弹性差、光泽度下降的人群
※骨质疏松、长期补钙效果不明显，需要增加骨酪韧性的人群
※患有关节炎、关节疼痛的人群
※肠胃不好，消化系统有疾病的人群
※身材偏瘦、曲线平坦、女人味不浓的女性
※身体弱小，不够健壮的男性
※术后康复，需要补充营养的人群
二、胶原蛋白的美容作用
胶原蛋白是维持皮肤与肌肉弹性的主要成分。但随着年龄增加，皮肤与肌肉中的水分会减少这是老化的开始。此时，胶原蛋白纤维开始变为细小，弹性蛋白之弹性也会减低，原先真皮中胶原蛋白与弹性蛋白交互构成有规则的网目结构会逐渐崩解，最后导致皱纹的生成。所以补充胶原蛋白能使皮肤保持年轻，道理即在于此。在国外，对胶原蛋白在美容方面的作用已进行深入的研究。试验证明：0．01％的胶原蛋白纯溶液就有良好的抗各种辐射的作用，且能形成很好的保水层，能供给皮肤所需要的全部水分。胶原蛋白应用于美容中的功效总结起来有如下几点
1、紧肤平皱的作用：
胶原蛋白通过表皮进入真皮层组织后，能迅速填补局部塌陷，改善松弛的皮肤，收紧皮肤，减少深皱纹、平复细纹。缩小毛孔，使皮肤紧绷且富有弹性。胶原蛋白使细胞变得丰满，从而使肌肤充盈，保持肌肤弹性与润泽，维持肌肤细腻光滑，皱纹舒展，呈现质感和透明感，有效防止老化。
2、保湿滋润的作用：
胶原蛋白本身是一种由三条螺旋形肽链聚合构成的透明状物质，这三种螺旋结构能牢牢的琐住水分和营养，让皮肤时刻保持丰润、水嫩的状态。胶原蛋白中还含有羟脯氨酸和丝氨酸，是天然的保湿因子，防止水分流失，维持皮肤弹性与活力。另外，因为胶原蛋白保水性及紧缩性的双重作用，还可改善干性及油性肌肤的分泌状态，调整皮肤表面的油脂平衡，使其逐渐趋于中性肌肤，毛孔紧缩细致。
3、恢复弹性的作用：
胶原蛋白进入人体后，经过吸收，生成新生细胞与原细胞结合，填补凹陷部位，使皮肤恢复弹性、柔韧充盈。
4、修复组织的作用：
胶原蛋白进入人体后，逐渐生成新生组织与周围正常皮肤共同协调，从而起到矫形作用，恢复正常外观，同时也可减轻患者的生理痛苦。对扩大性痤疮疤痕，皮内或皮下组织受损，上皮收缩，深度皱纹或者其他软组织的缺损均有明显的改善作用。
5、美白淡斑的作用：
胶原蛋白能使细胞粘接更紧密，阻止酪氨酸转化为黑色素，不给黑色素、毒素藏身之地，令皮肤肤色白暂、色斑淡出。
6、减肥美体的作用
减肥需要燃烧脂肪（分解代谢），而胶原蛋白能使这种分解代谢过程增加和延长，燃烧更多的脂肪从而达到减肥的目的。并且胶原蛋白对细胞的修补机能会消耗大量热能，这种机能会消耗大量热能，这种机能必须在睡眠状态下进行，因此服用胶原蛋白，睡觉就能减肥，轻松减肥的梦想变成了现实。由于这种减肥方法效果温和持久（口服胶原蛋白后，熟睡无进食状态下提高脂肪燃烧率 60% 左右），对于正在减肥的人，口服胶原蛋白不仅能够加速脂肪燃烧，而且由于胶原蛋白能促进皮肤深层纤维组织的张力与弹性，使得减肥后的皮肤仍然具有弹性和光泽，防止出现皮肤松弛、下垂、脱水等常见的减肥并发症。
7、丰胸健美乳房的作用
乳房的健美对女性至关重要。丰满、坚挺的乳房不仅展示了女性的曲线形体美，更体现了女性的自信和自尊。
首先，随着年龄的增长，乳房皮肤中胶原蛋白含量不断减少，口服活性胶原蛋白在保养面部皮肤的同时，保养着全身皮肤，乳房上的皮肤也没有被遗忘。经服用胶原蛋白后，乳房上的皮肤得到养护，弹性增强、色泽改良。
第二，也是最重要的原因，补充胶原蛋白对整个乳房实体有营养保健的作用。组织学研究表明，乳房主要由结缔组织和脂肪组织构成。而结缔组织的主体就是胶原纤维组织。发育幼小的乳房补充活性胶原蛋白后，乳房则膨大隆起。老年松弛的乳房中脂肪比例大、胶原比例小、乳房则下垂、松懈。
其三，胶原纤维有绷紧乳房的作用。口服胶原蛋白的健胸作用不仅仅局限于增大乳房的体积，更重要的作用是能上提下垂的乳房及绷紧松弛的乳房。分析乳房的结构可以看到，年轻时，皮肤的致密结缔组织纤维（由胶原纤维组成）将乳腺牢固悬系和固定在皮肤上，行使着系带和“绳索”的功能，使乳房挺拔秀丽。随着岁月流失，胶原纤维三螺旋变得松懈（就象老化的松紧带一样失去拉力），不能将乳房拉紧，造成了乳房扁平下垂。而服用胶原蛋白可以纠正乳房的这种衰老退化现象。
7、消除黑眼圈和眼袋的作用
黑眼圈现象是因为人的眼睛组织较为松弛，眼袋现象则是因为眼部皮肤下垂造成的。由于该部位的皮肤薄，组织结构一旦松弛，血液就会聚积，导致黑眼圈和眼袋的发生。胶原蛋白是结缔组织的重要成分，给皮肤提供支撑力、张力，使皮肤紧实，从而改善黑眼圈和眼袋。
8、美发亮甲的作用
缺少胶原蛋白，头发会干枯分叉，胶原蛋白能营养发丝，解决头发分叉，让头发润泽有弹性。软润指甲 滋养甲面 可改变指甲黯淡无光、发黄、断裂和指甲色素沉淀等种种烦恼，胶原蛋白能使您的指甲表面不仅光滑亮丽，而且还能使指甲强韧不易断裂。
9、美洋1800鱼胶原蛋白的美容疗效 ※服用1—4周
迅速补充缺失水分，皮肤湿润度增加，皮屑减少；皮肤不再油腻、粗糙、干燥；皮肤比服用前略白，抚摸时明显感觉柔滑滋润。※服用5—8周
经过第二个月的继续修复和补充，全身皮肤都会变得水嫩亮白，色斑、皱纹、鱼尾纹、痘印、黑眼圈、眼袋等开始淡化，皮肤锁水能力加强，肌肤非常紧致，有弹性，皮肤亮白度平均提高2-6度。
※服用9——15周 三、四个月的服用过后，皮肤已轻松恢复到了年轻时的细腻、紧致，细纹、眼袋、黑斑、痘印、暗疮基本消失，指甲表面也变的光滑亮丽，头发柔顺有光泽，整个人气色大变，精神矍铄、神采奕奕！
※服用16—22周
前期的效果将得到综合巩固和提升，皮肤抵抗外界刺激的能力和自我恢复能力显著加强，皮肤如新生婴儿般一尘不染，红润有光泽，娇柔动人，指甲也富有弹性和韧性，乳房丰满，骨骼强硬，走路腿脚有力。全身由内而外，从根本上彻底恢复到年轻时的状态，魅力、自信、年轻的女人非你莫属！
三、胶原蛋白的健康作用
胶原蛋白是由成纤维细胞合成的，但随着人的年龄增长，以及自由基的大量产生，胶原蛋白结构也在发生变化并渐渐流失（正常人体每年会流失1%的胶原蛋白），导致体内的胶原蛋白含量和种类发生劣化。与此同时，成纤维细胞的合成能力下降，胶原蛋白的降解却加快，直接导致可溶性胶原蛋白逐渐减少，细胞间具有很好储水性的粘多糖也减少，结缔组织弹性低下，皮肤就会失去弹性并变薄、老化。不仅仅如此，导致真皮的纤维断裂、脂肪萎缩、汗腺及皮脂腺分泌减少，使皮肤变得干燥、皱纹增多、出现色斑等，这些现象都是“衰老”的表现！这种衰老现象不断地随着年龄的增长而加剧，直观地表现为：
※ 面部出现皱纹和老人斑。※ 皮肤发暗和失去光泽。※ 皮肤粗糙和弹性变差。※ 动脉血管硬化。
※ 眼球晶体出现老年性白内障、角膜透明度减小。※ 胳膊腿不灵活甚至关节疼痛等现象。
而胶原蛋白在人体的皮肤、骨质、肌腱以及其他结缔组织中参与细胞的迁移、分化和增殖，具有有很强的生物活性和生物功能，是新陈代谢的促进剂，促进人体内胶原蛋白的合成，减缓生物组织衰老和功能减退。因此，胶原蛋白对于老年人、更年期妇女、运动过度者、骨折者或关节容易酸痛者提高生命健康质量尤为重要。
1、胶原蛋白和补钙的关系
随着医学科学的进步，人们对于补钙的认识也不断深化。五六十年代医学上提倡补钙；七八十年代认识到维生素d3利于钙的吸收，提倡晒太阳和补充d3；现在才明白，人体主要不是缺钙而是特别需要补充胶原蛋白来吸附和固定钙。
人体内的钙，主要存储在骨骼和牙齿里，少部分在血浆中（常说的血钙）。骨钙与血钙处于互相调节的过程中。食物里的钙经消化由肠道吸收进入血液，血浆里的蛋白质（起作用的主要是基中的羟脯氨酸）把钙运送到去由成骨细胞矿化后形成骨质、牙齿等组织。血浆里的钙浓度过低的话，骨钙会溶解出来补充到血液里。一般来说，血液中羟脯氨酸的含量是吸收钙的一个重要指标。胶原蛋白中含有其它蛋白质无法比较的丰富的羟脯氨酸和羟赖氨酸，而羟脯氨酸不仅仅是将血浆中的钙运送到骨细胞的运载工具，骨组织中的骨胶原羟基磷钙的黏合剂，骨质就是羟基磷酸钙与骨胶原的结合体。由此，我们明白一个道理：补钙，应该是胶原蛋白的补充在先，其次才是钙质的补充。只要人体能够摄入足够的胶原蛋白，并且胶原蛋白的代谢功能是正常的，就不必特意额外地摄取钙。
2、胶原蛋白的降血糖作用
胶原蛋白中含有胶原蛋白多肽-铬，小白鼠动物实验发现胶原蛋白多肽 – 铬（iii）螯合物对于糖尿病空腹血糖的降低、增加肝糖原的合成及葡萄糖激酶的活性、控制甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，提高高密度脂蛋白胆固醇水平有明显的作用。结果表明这种胶原多肽-----铬有降血糖、降血脂及抗应激的保健功能
3、胶原蛋白的降压作用
三大现代疾病：肥胖、高血压和血液中高甘油三酯、高胆固醇，严重威胁人类生活质量。胶原蛋白中还有一定量的骨胶原九肽，九肽可以抑制造成高血压的血管紧张素转化酶（ace）活性，动物实验也证明了它显著降低高血压大鼠的动脉血压。食物中的胶原蛋白在体内消化过程中，也有可能会水解出这样的九肽，具有抑制血管紧张素转换酶活性的作用，可降低血甘油三脂和胆固醇，从而降低血压。胶原蛋白还对血管内皮细胞具有明显的促进增殖作用，即对血管损伤有一定的保护和修复作用。因此，有利于降低体重和血脂，适用于超重病人和动脉硬化的病人。
4、胶原蛋白抑制癌细胞的作用
癌细胞的增殖和转移是两种不同的表现形式。
首先是癌细胞的增殖，癌肿瘤是一个充满毛细血管的血包，癌细胞为了获取大量的营养成分，就要疯狂地分泌出血管形成因子taf来使毛细血管急速增加，因为毛细血管是癌细胞获取营养成分的通道。
其次是癌细胞的转移。当癌细胞要转移到别的脏器时，首先要往该器官深处移动，以获得更好的发展环境。任何器官表面都有胶原蛋白构成的基底膜保护着。所以癌细胞就必须要穿透该处的胶原蛋白构成的基底膜组织进入该器官，并且必须到达有血管的部位。然后，癌细胞再进一步穿透血管（血管的中间层就是胶原蛋白构成的），进入该血管并随着血管内血液循环，以便快速移动扩散到其他部位。
事物总是矛盾的，癌细胞要增殖和转移，机体内就有抑制癌细胞增殖和控制癌细胞转移的机制。
首先，每个单独的细胞外面被细胞外基质（主要是胶原蛋白）包裹着，细胞与细胞之间的连接也是靠细胞外基质粘连起来的，细胞外基质在肿瘤形成中起着关键的作用。因为癌肿瘤的表面被胶原纤维包裹着，胶原纤维的作用之一就是抑制癌细胞的生长和转移。任何健康的人每天都有至少数以千计的癌细胞产生，甚至许多人至死都是癌肿瘤携带者。为什么有人发病成为癌症患者，而有些人就没有呢?有的癌患者就可以控制住癌细胞的增殖和转移，而有的患者就控制不住。实际上，包裹在癌细胞外侧的胶原蛋白就是“防卫军”，无时无刻地与癌细胞在进行卓绝的“攻守之战”。身体有足够的胶原蛋白的话，胶原纤维就会把癌细胞紧紧地包裹，使其不能任意增殖扩散。当人体缺乏胶原蛋白的时候，癌细胞突破这一防线就开始肆虐增殖和转移。
另外，当人体的免疫蛋白与胶原蛋白结合，巨噬细胞、淋巴细胞、血浆细胞及免疫球蛋白等免疫机能就会总体性提高，可以吞噬癌细胞。
胶原纤维还能约束息肉增生和良性瘤的扩大。尤其当患有这些疾病的时候，由于身体需要大量的胶原蛋白，而人体自我合成速度又不足以满足身体需要的话，就必须通过食物补充胶原蛋白。通过食物还不能有效补充胶原蛋白的话，身体就只好“东拆西借”----分解身体其它部位的胶原组织向病灶供给。所以，我们常常看到末期癌症患者身体消瘦、骨架缩小就是这个缘故。
尤其，癌症患者接受的化疗、放疗、电疗等疗法，在消灭癌细胞的同时，敌我不分地将包裹在肿瘤外层的胶原纤维也分解摧毁了。而肿瘤一旦暴露后，失去胶原纤维的束缚，更加加速了癌细胞的扩散速度。因此，癌症患者更需要补充胶原蛋白加强辅助治疗
5、胶原蛋白与免疫机能
人体的免疫力的高低因人而异，原因很多。但是，基本原因是免疫球蛋白、淋巴球与巨噬细胞等免疫细胞在发现外来异物侵入机体时，会将异物包围吞噬，甚至自我牺牲以保护身体。所以，免疫细胞越多越强壮，身体免疫力越高。
研究表明，胶原蛋白与免疫蛋白相结合就可以有效地增强人体免疫系统的免疫力。
当免疫细胞随血液流经身体各处时，会透过血管壁，接近外来的异物（如细菌、病毒等），若这一部位胶原蛋白含量丰富的话，免疫细胞就与胶原蛋白有机结合起来，共同对抗入侵异物。这一生物活动一旦发生，身体就像接到全体总动员令一样，一连串的免疫机能都被激活，巨噬细胞、淋巴球、血浆细胞及免疫球蛋白等免疫机能就会提高，人体抵抗力也就增强了。
6、胶原蛋白与儿童和青少年发育
影响儿童和青少年发育的因素，除了遗传因素（占40~50%），营养因素是最重要的。营养因素中，蛋白质的影响最为直接。过去，日本人的身高不如中国人，而最新的统计结果，我国7岁男女儿童的平均身高分别比日本同龄儿童低0.6厘米和0.5厘米，15~18岁男女青少年分别平均比日本同龄者矮1.4厘米和0.6厘米。拔除掉遗传因素外，无疑与营养素摄入多少有直接关系。
人体中的矿物质约占体重的5%，其中的钙约占体重的2%。钙的总量的99%。分页在骨骼和牙齿中，其余1%分页在血液、细胞间液及软组织中。人在20岁之前是骨骼的生长阶段，有两个生长高峰期：第一个高峰1岁以前，如果发育迟缓就会出牙晚、学步晚、鸡胸。第二个高峰是12~14岁，如果发育迟缓就会身材矮小、生长痛等。
动物实验发现，给幼马饮料中添加胶原蛋白，通过对关节间隙的测定结果表明，与对照组相比较，幼马的软骨生长茁壮、鬃毛稠密，体高47%，马蹄生长37%。这说明，生物体发育期对于骨质发育的需求。胶原蛋白是治疗缺钙症的激活剂，对弥补动物的幼年期、青春期对于缺钙以及骨量需要有显著的疗效。人的发声器官主要是由喉头、喉结和甲状软骨组成，这些器官又是有弹性蛋白质薄膜构成，变声期的青少年保护好发声器官的发育非常重要，尤其是喜欢声乐的艺术少年，特别要注意在变声期多吃富含胶原蛋白的食物和摄取胶原蛋白。小贴士
自制胶原蛋白面膜
使用胶原蛋白粉最好是“食用+外敷”，而且最好是选用纯的（无复配物的）、鱼的胶原蛋白，原因是鱼胶原更接近人体胶原，并且鱼的活化温度低10℃左右，更适合做面膜！1个月就会感觉毛孔明显收紧，而且脸上还很光滑，皮肤也比没有吃以前更嫩一些！第一步：准备调制胶原蛋白面膜的小碗和面膜纸。第二步：先将一袋胶原蛋白粉倒入小碗中。
第三步：放入适量的水（牛奶也可），胶原蛋白粉正在主动溶解。
第四步：把面膜纸折叠一下放入小碗中，轻轻地压一下，让面膜纸完全浸湿即可。
第五步：静置5-10分钟，胶原蛋白粉已经主动溶于水中。
第六步：拿起面膜纸敷于脸部，用剩下的胶原蛋白粉溶液轻拍脸部，让面膜纸紧贴面部，过10-15分钟取下面膜纸即可。
注：也可将胶原蛋白溶液直接刷在脸上，再将面膜纸浸湿敷脸。
蛋白表达方式篇二
pcv2是圆环病毒科(circoviridae)圆环病毒属成员，为单股环状负链无囊膜的dna病毒, 为已知的最小动物病毒之一，约17~ 20nm, 二十面体对称。根据病毒的抗原性和基因组成不同，可分为2种基因型或称血清型, 即pcv1型和pcv2型。pcv1无致病性。pcv2具有致病性，基因组全长1767bp或1768bp，包括11个读码框，其中orf2编码病毒的主要结构蛋白)核衣壳蛋白(cap)，其n端包含一个由41个氨基酸残基组成的的核定位信号(nuclear location signal，nls)，与pcv2在细胞核内定位有关。mahe和liu等分别在sf 9真核细胞及大肠杆菌中进行了pcv2cap蛋白的表达, 但cap蛋白的表达量较低。为了提高cap蛋白的表达量, 本实验成功构建去除nls的重组质粒, 并对其进行表达、纯化、鉴定。
1材料和方法
1.1pcv-581重组质粒的构建
1.1.1pcr扩增去除nls基因的pcv-581
1.1.1.1引物的设计与合成: 根据本实验室保存毒株的测序结果, 用oligo6.0设计删除核定位信号特异引物(由大连宝生物工程公司合成), 并引入限制性内切酶bamhi、hindiii(加下划线表示)。上游引物: acaggatccatggcatcttcaacac;下游引物: gaaagcttt tcattaagggttaagt;产物长度581bp。
1.1.1.2pcv2核酸的提取: 取接种pcv2病毒的pk-15细胞悬液500ul, 常规方法提取, 最后加20ul灭菌去离子水溶解,-20度保存。
1.1.1.3pcr扩增: pcr的反应体系总体积25ul: 上、下游引物(10ulmol/l)各1.0ul，10×rcr buffer2.5ul、dntp3.0ul(2.5mm each)，提取的dna2.0ll,taq酶0.25ll(5u/ ll, takara), 去离
子水补到25ll。反应参数为: 95e , 5min;94e, 45
s;55.9e, 45s;72e, 45s;30个循环;72e , 7min。
取5llpcr产物进行电泳分析(见图1)。
1.1.1.4pcr扩增产物的酶切、回收: 醇沉淀pcr
扩增产物、酶切、回收。具体操作方法如下: pcr
产物补到100ll, 加入等体积异丙醇, 置-20e 静
止过夜, 13 000r/ min离心15min弃上清, 加入
600ll75%乙醇, 7000r/min离心5min, 倒掉上清,晾干, 加入10ll灭菌去离子水溶解。将醇沉产物
进行bamhi酶切, 体系为20ll: 10@buffer k2ll,bamhi 1ll(15u/ ll , takara), 醇沉产物10ll,h2o7ll, 37e 酶切1h。将酶切产物继续醇沉淀
(方法步骤同上)后进行hindiii(15u/ ll, takara)
单酶切, 酶切体系同上, 回收目的片段。
1.2pqe-pcv581重组质粒的构建和鉴定: 将载
体pqe-32(qiagen)质粒用bamhi 和hindiii双
酶切, 做100ll 酶切体系: 10@ buffer k10ll,bamhi2ll, hindiii 2ll, pqe-32质粒70ll, h2o
16ll。37e 酶切2h15min, 用胶回收试剂盒回收
(tiangen, 操作按照说明书进行), 目的片段和载
体常规方法连接、转化m15、筛选阳性重组质粒
pqe-pcv581。酶切鉴定(见图2)。
1.3重组蛋白的诱导表达及纯化
从含有氨苄抗性的琼脂平板上挑取单个阳性
菌落接种到5ml氨苄抗性(100lg/ ml)的lb液体 培养基中, 37e 过夜振荡培养、活化, 取过夜活化 的培养物按照的比例接种到5ml含氨苄抗性的液 体lb培养基, 37e 振荡培养, 培养至od600nm达 0.4-0.6, 然后加入iptg(takara)至终浓度为0.2mmol/ l、0.4mmol/ l、0.6mmol/ l、0.8mmol/ l、1.0mmol/l、1.2mmol/l继续培养, 分别在诱导前、诱 导1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h取样, 取1ml菌液离心
蛋白表达方式篇三
没有活性可能存在两种原因：his tag影响了活性，尝试切除his tag后再次测定酶活。如果目前载体上没有酶切位点可以更换至有酶切位点的载体（例如pet28a n段his tag可以使用thrombin切除his tag）。或者重新构建表达载体，自己引入酶切位点。如果切除了标签还是没有活性那就是蛋白本身的问题了。有些真核蛋白即使上清表达也是没有正确折叠的，或者没有进行表达后修饰，没有生物活性。这种情况就比较杯具了。
2楼说的包涵体，我觉得有可能，你的粗酶活性比较弱，产生包涵体之后就会更弱了。
当然到底是不是由于包涵体的原因，还得确定。
1.在n末端加入标签
这一系列载体的n末端加有标签，其中pqe-30、pqe-9带有6×组氨酸标签，pqe30系列中的三个载体的多克隆位点距离其实密码子而个相差一个碱基，pqe-9则是在多克隆位点处的设计较简单。pqe40则是带有6×组氨酸二氢叶酸还原酶标签（6×his-dhfr），对于比较难表达的蛋白以及蛋白太小容易被降解的蛋白可以利用这种标签。它可以保证蛋白的稳定性，同时不会对外源蛋白的免疫原性造成很大的影响，非常适合用于表位筛选。
2.在c末端加入标签
在蛋白的c末端加入标签的好处是显而易见的：可以利用基因本身的atg作为起始密码子，保证了蛋白天然的n末端，这对于一些医药用的重组蛋白是相当重要的；同时可以纯化出那些完整表达的蛋白，一些在翻译过程中容易造成“暂停”现象的蛋白就不用怕纯化产物里含有不完整的产物。融合了6×组氨酸标签的有pqe-60和pqe-70，融合了6×his-dhfr的有pqe-16。
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